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操作ELISA試劑盒的實驗步驟及常見問題匯總
ELISA試劑盒實驗操作步驟的詳細(xì)說明:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
ELISA試劑盒實驗操作的常見問題。
一、一次ELISA實驗需要多長時間?
雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時,競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時。
二、血清樣本如何處理?
全血標(biāo)本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
三、血漿樣本如何處理?
建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,于1000×g離心15分鐘,仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
四、細(xì)胞上清液樣本如何處理?
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細(xì)收集上清。
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